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實驗簡介

miRNA pull down實驗簡介


miRNA pull-down是研究目標(biāo)miRNA與其他RNA或RNA結(jié)合蛋白(RBPs)之間相互作用的技術(shù)。 

體外miRNA pull-down:首先合成生物素標(biāo)記的miRNA探針(也可以是pre-miRNA或pri-miRNA探針),在體外條件下將其結(jié)合到鏈霉親和素磁珠上,再與待測樣本裂解液孵育,捕獲與miRNA結(jié)合的其他RNA(如mRNA、lncRNA和circRNA)或RBPs;提取的RNA可以采用qPCR方法檢測,洗脫的蛋白質(zhì)可以采用western-blot或質(zhì)譜(LC-MS/MS)技術(shù)檢測。 

體內(nèi)miRNA pull-down:將生物素標(biāo)記的miRNA探針轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中,裂解細(xì)胞后,采用鏈霉親和素磁珠捕獲樣本裂解液中的生物素miRNA-RNA復(fù)合物;隨后,洗脫純化得到RNA,并進(jìn)行高通量測序或qPCR檢測。


輝駿生物10年科研服務(wù)經(jīng)驗,專業(yè)提供分子互作實驗服務(wù),包括蛋白與蛋白、蛋白與DNA、蛋白與RNA、RNA與RNA的相互作用技術(shù),經(jīng)驗豐富,實驗結(jié)果穩(wěn)定、可靠。

我公司自有分子、細(xì)胞和質(zhì)譜實驗平臺,能執(zhí)行最優(yōu)的實驗路線,對微量互作蛋白的質(zhì)譜鑒定有充足把控力,對后續(xù)功能分析有獨到見解。

我們不僅會提供專業(yè)的售前方案建議、而且售后技術(shù)支持將一直保持到文章發(fā)表,確保您安心進(jìn)行下游實驗及投稿。

目前,客戶已在Nature子刊、Oncogene、Cell Research等高水平期刊成功發(fā)表大量高分文章(點擊查看客戶文獻(xiàn))。




miRNA pull down實驗流程


輝駿生物miRNA pull down調(diào)取結(jié)合蛋白原理圖

圖一:miRNA pull-down調(diào)取結(jié)合蛋白原理圖


輝駿生物miRNA pull down調(diào)取結(jié)合RNA原理.png

圖二:miRNA pull down調(diào)取結(jié)合RNA原理圖





miRNA pull-down應(yīng)用背景


MicroRNA(miRNA)是真核生物中廣泛存在的一種長約21~23個核苷酸的RNA分子。miRNA的產(chǎn)生也是一個高度調(diào)控的多步驟過程。首先,攜帶miRNA信息的基因被轉(zhuǎn)錄成初級miRNA(pri-miRNA),再被Drosha復(fù)合體剪切成具有莖環(huán)結(jié)構(gòu)的前體miRNA(pre-miRNA),最后被Dicer復(fù)合體進(jìn)一步切割,產(chǎn)生成熟的miRNA。成熟的miRNA與Argonaute蛋白等組裝形成RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合體(RISC),常常特異性結(jié)合靶RNA(例如mRNA、lncRNA、circRNA)并調(diào)控其表達(dá)。 


每個miRNA可以有多個靶基因,而幾個miRNAs也可以調(diào)節(jié)同一個基因,并且這種調(diào)控是動態(tài)變化的。此外,從miRNA的生成、轉(zhuǎn)運到發(fā)揮功能,都需要很多蛋白質(zhì)的參與。因此,研究miRNA與RNA、蛋白質(zhì)的結(jié)合對揭示很多生物學(xué)現(xiàn)象具有重要意義。

技術(shù)支持聯(lián)系
18927549347、13430303037




miRNA pulldown實驗—輝駿生物服務(wù)內(nèi)容


 服務(wù)項目 服務(wù)內(nèi)容 結(jié)果交付 實驗周期 客戶提價格

體外miRNA Pull-down qPCR

 合成生物素miRNA探針 探針合成報告 5-6周

 miRNA序列

 待測RNA序列

 實驗樣本


點擊詢價
 qPCR檢測樣本中的待測靶RNA Input qPCR檢測結(jié)果

 miRNA pull-down捕獲miRNA-靶RNA復(fù)合體并檢測

(實驗組、對照組)

 pull-down qPCR檢測結(jié)果

 pull-down實驗報告

體內(nèi)miRNA Pull-down qPCR

 合成生物素miRNA探針 探針合成報告 7-8周

 miRNA序列

 待測RNA序列

 待轉(zhuǎn)染細(xì)胞及其培養(yǎng)方法



點擊詢價


 qPCR檢測樣本中的待測靶RNA

 Input qPCR檢測結(jié)果

 miRNA探針轉(zhuǎn)染細(xì)胞

 pull-down qPCR檢測結(jié)果

 pull-down實驗報告

 miRNA pull-down捕獲miRNA-靶RNA復(fù)合體并檢測

(實驗組、對照組)

體外miRNA Pull-down WB
 合成生物素miRNA探針 探針合成報告 5-6周

 miRNA序列

 待測RNA序列

 待測蛋白序列

 待測蛋白抗體
點擊詢價
 Western blot(WB)檢測樣本中的待測靶蛋白 Input WB檢測結(jié)果

 miRNA pull-down捕獲miRNA-靶蛋白復(fù)合體并檢測

(實驗組、對照組)

 pull-down WB檢測結(jié)果

 pull-down實驗報告
體外miRNA Pull-down MS 合成生物素miRNA探針 探針合成報告 6-7周

 miRNA序列

 實驗樣本



點擊詢價


 miRNA pull-down捕獲miRNA-靶蛋白復(fù)合體

(實驗組、對照組)

 pull-down產(chǎn)物SDS-PAGE圖

 pull-down實驗報告
 LC-MS/MS檢測和數(shù)據(jù)分析

 質(zhì)譜檢測結(jié)果和報告

 互作蛋白篩選表格
 生物信息學(xué)分析(GO、KEGG pathway、String) 生物信息學(xué)分析結(jié)果和報告





miRNA Pull-down樣本要求


1. 送樣量要求

樣本類型
miRNA pull down WB/qPCR建議送樣量miRNA pull down MS建議送樣量
動物細(xì)胞
2*10e7個細(xì)胞/組(約2個10cm皿)3*10e7個細(xì)胞/組(約3個10cm皿)
動物組織1g/組2g/組

▲注意:以上均為每組樣本的送樣量,如果實驗和對照組用的樣本一致,此樣本量*2。詳細(xì)送樣指南可聯(lián)系輝駿生物索取。


2. 樣本運輸要求

(1)樣本一定要做好標(biāo)記,應(yīng)用油性防凍記號筆或標(biāo)簽紙在管上注明樣本名稱或編號;

(2)樣本較多或需要分批做,要將樣本分裝;

(3)干冰取樣/運輸;需要至少在送樣前一天通知我方。





miRNA Pull Down結(jié)果示例


輝駿生物miRNA pull down WB檢測圖(陽性).jpg

miRNA pull down WB檢測圖(陽性)


輝駿生物miRNA pull down qPCR檢測結(jié)果(陽性)       輝駿生物miRNA pull down qPCR檢測結(jié)果(陽性)

miRNA pull down qPCR檢測結(jié)果(陽性)


技術(shù)支持聯(lián)系
18927549347、13430303037




miRNA pull-down參考文獻(xiàn)


 1. Chen X.W. et al: TDP-43 regulates cancer-associated microRNAs. Protein Cell 2018. (1區(qū),IF=21.1).

使用相關(guān)技術(shù):體外miRNA pull down WB




 2. Polypyrimidine tract-binding protein blocks miRNA-124 biogenesis to enforce its neuronal-specific expression in the mouse. PNAS. 2018. (1區(qū),IF=9.4).

使用相關(guān)技術(shù):體外pre-miRNA pull down WB技術(shù)服務(wù)

  3. Du A.S. et al: M6A-mediated upregulation of circMDK promotes tumorigenesis and acts as a nanotherapeutic target in hepatocellular carcinoma. Molecular Cancer. (1區(qū),IF=37.3).

使用相關(guān)技術(shù)體內(nèi) miRNA pull down qPCR實驗







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