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服務(wù)介紹

lncRNA與microRNA互作概述


lncRNA (Long non-coding RNA)即長鏈非編碼RNA,通常長度在200-100000 nt,具有5’帽子和3’polyA尾巴結(jié)構(gòu)。

lncRNAs作用范圍廣泛,機制非常復(fù)雜,可以與DNA、RNA、蛋白質(zhì)互作,參與表觀、轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)錄后等多個層面的調(diào)控,在生命活動中有重要作用。lncRNA與miRNA的結(jié)合是其重要的調(diào)控方式之一,lncRNA作為“miRNA海綿”,抑制miRNA與mRNA的結(jié)合,促進mRNA表達,該機制被稱為ceRNA調(diào)控機制。





lncRNA與microRNA互作服務(wù)信息


目前主要有兩類方法用于研究lncRNA與microRNA的互作,一是雙熒光素酶報告基因法,二是RNA pull down法。


lncRNA與microRNA互作技術(shù)服務(wù)
技術(shù)類型
技術(shù)目標技術(shù)原價格
雙熒光素酶驗證lncRNA與miRNA結(jié)合將待測lncRNA序列構(gòu)建到熒光素酶基因的下游,該質(zhì)粒與miRNA mimics共轉(zhuǎn)染待測細胞;如果miRNA能夠結(jié)合lncRNA,則會抑制上游熒光素酶表達,使熒光素酶催化底物的光強減弱,根據(jù)化學(xué)發(fā)光值判斷miRNA是否與待測lncRNA結(jié)合





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雙熒光素酶驗證ceRNA機制將待測mRNA的3’UTR序列構(gòu)建到熒光素酶基因的下游,該質(zhì)粒與miRNA mimics、lncRNA表達載體共轉(zhuǎn)染待測細胞;與lncRNA空載對照組相比,當(dāng)轉(zhuǎn)入lncRNA表達載體時,miRNA對靶基因3’UTR的調(diào)控減弱,說明三者間存在ceRNA調(diào)控
外源性RNA pull down驗證lncRNA與miRNA結(jié)合體外轉(zhuǎn)錄帶有生物素標記的lncRNA,并與樣本裂解液孵育,之后利用鏈霉親和素磁珠捕獲體外條件下結(jié)合的靶l(wèi)ncRNA-miRNA復(fù)合物,采用qPCR技術(shù)檢測待測的miRNA
內(nèi)源性RNA pull down
驗證lncRNA與miRNA結(jié)合將自主研發(fā)的特異性RNA標簽與目標lncRNA構(gòu)建融合表達載體,轉(zhuǎn)染細胞使其融合表達,通過與特異性RNA標簽結(jié)合的親和介質(zhì),將RNA標簽-lncRNA與miRNA的復(fù)合體純化出來,采用qPCR法檢測待測miRNA


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lncRNA與microRNA互作服務(wù)優(yōu)勢


1

十年服務(wù)經(jīng)驗,眾多服務(wù)案例,服務(wù)成果得到優(yōu)秀期刊認可


2
自有分子及細胞生物實驗平臺,能有效制定并執(zhí)行最優(yōu)的實驗路線


3
售后技術(shù)支持將一直保持到客戶發(fā)表文章,確??蛻舭残倪M行下游實驗及投稿






lncRNA與microRNA互作研究案例


lncRNA-miRNA互作文獻圖.png


研究背景


肝細胞癌(HCC)極易發(fā)生轉(zhuǎn)移。TGF-β誘導(dǎo)的上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)在癌細胞擴散中的作用已被證實,但lncRNAs在TGF信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中的作用仍不清楚。




研究路線


1
2

?對HCC細胞和TGF-β誘導(dǎo)HCC細胞的基因表達檢測發(fā)現(xiàn)lncRNA-ATB表達水平較高

?RIP、RNA pull down、雙熒光素酶和基因表達實驗證實對EMT和腫瘤侵襲有抑制作用的miR-200家族可結(jié)合lncRNA-ATB

3
4

?表達檢測和熒光素酶實驗表明lncRNA與ZEB1或ZEB2競爭結(jié)合miR-200s,三者存在ceRNA調(diào)控

?細胞實驗、肝組織檢測和小鼠模型實驗均表明lncRNA-ATB通過上述ceRNA作用誘導(dǎo)EMT并促進癌細胞侵襲

5
6

?RIP、RNA pull down等實驗篩選并確定了與lncRNA-ATB結(jié)合的mRNA“IL-11”

?細胞實驗、肝組織檢測和小鼠模型實驗均表明lncRNA-ATB以不依賴于miR-200s的方式促進IL-11 mRNA穩(wěn)定性,進而激活STAT3信號,促進癌轉(zhuǎn)移




研究結(jié)論


TGF-β激活的lncRNA(lncRNA-ATB)在肝細胞癌(HCC)轉(zhuǎn)移中上調(diào),并與不良預(yù)后相關(guān)。本研究從兩個方向揭示了lncRNA促進HCC轉(zhuǎn)移的機制:(1)lncRNA-ATB通過競爭性結(jié)合miR-200家族上調(diào)ZEB1和ZEB2,誘導(dǎo)EMT和侵襲;(2)lncRNA-ATB通過結(jié)合IL-11mRNA、自分泌誘導(dǎo)IL-11和觸發(fā)STAT3信號,促進癌細胞轉(zhuǎn)移到其它部位。


 

客戶文獻


Yuan J.H. et al: A Long Noncoding RNA Activated by TGF-b Promotes the Invasion-Metastasis Cascade in Hepatocellular Carcinoma. Cancer cell. 2014.




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